Evaluation of Viability and Purity of Pathogenic Bacterial Strains Stored at -80°C: A Five-Year Study in Bamako

Évaluation de la Viabilité et de la Pureté des Souches Bactériennes Pathogènes Conservées à -80 °C : Étude sur cinq ans à Bamako

Abstract

RÉSUMÉ
Introduction. Une bio banque est une banque biologique qui accepte, traite, stocke et distribue des échantillons biologiques et les données associées à des fins de recherche. Le diagnostic bactériologique des échantillons est une activité phare de routine et mais les initiatives de conservation en guise de la constitution de biobanking des souches appelées souchothèques deviennent très rare cadrant avec les exigences générales de la nouvelle norme ISO 20387 biobanking-biotechnologie à l’INSP. Méthodologie. Il s'agissait d'une étude transversale descriptive rétrospective des souches bactériennes pathogènes conservées à – 80°C en moins de deux (2) ans du service de bactériologique et virologique de l’institut national de recherche en santé publique (INSP) de 2015 à 2020. Les méthodes utilisées étaient la culture et les tests de Puretés qui consistaient à réisoler en ensemençant les souches sur les géloses au sang frais et des géloses au sang cuit au polyvitalex et les facteurs V et X, les géloses SS et des géloses Hecktoen incubées sans ou sous CO2 entre 5 à 10 % et pendant 24 heures à 72 heures à 37°C selon le cas. Résultats. Parmi les souches conservées, le Streptococcus pneumoniae était plus fréquent soit 45,5 %. Au rapprochement des puretés des souches conservées à un an et à 2 ans, les souches pures avaient une fréquence plus élevée soit 93,5 %, avec P 0,001. Nos résultats sont meilleurs avec 15 % du bouillon glycériné à – 80 °C, similaires à ceux de Chandra. S, Rutaganira FU en 2025 qui ont prouvé que les échantillons conservés dans 10 % de glycérol donnaient une meilleure récupération après congélation. Conclusion. Les souches bactériennes pathogènes conservées à long terme dans 10% du bouillon glycériné à – 80 °C en moins de 2 ans restent encore pures et viables à 93,5 %.
ABSTRACT
Introduction. A biobank is a biological repository that accepts, processes, stores, and distributes biological samples and associated data for research purposes. Bacteriological diagnosis of samples is a routine core activity, but conservation initiatives for the creation of biobanks of strains called souchotecques are becoming very rare, in line with the general requirements of the new ISO 20387 biobanking-biotechnology standard at the INSP. Methodology. This was a retrospective descriptive cross-sectional study of pathogenic bacterial strains stored at -80°C in less than two (2) years in the bacteriological and virological department of the National Institute for Public Health Research (INRSP) from 2015 to 2020. The methods used were culture and purity tests which consisted of re-isolating the strains by inoculating them on fresh blood agar and cooked blood agar with polyvitalex and factors V and X, SS agar and Hecktoen agar incubated without or under CO2 between 5 and 10% and for 24 hours to 72 hours at 37°C as appropriate. Results. Among the stored strains, Streptococcus pneumoniae had the highest frequency of 45.5%. When comparing the purities of strains stored at one year and two years, the pure strains had a higher frequency, i.e., 93.5%, with P < 0.001. Our results are better with 10% glycerin broth at -80°C, similar to those of Chandra S, Rutaganira FU in 2025, who demonstrated that samples stored in 10% glycerol yielded better recovery after freezing. Conclusion. Pathogenic bacterial strains stored long-term in 10% glycerin broth at -80°C for less than two years still remain pure and viable at 93.5%.